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梦幻诛仙手游丹青阁什么时候出 » 產品中心 » 生物試劑

RNA總提取液

發表時間:2014-10-23 瀏覽次數:2004  【關閉

TRIpure試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心,樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后,RNA可以通過異丙醇沉淀來還原。在除去水樣層后,樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。共純化DNA對于樣品間標準化RNA的產量十分有用。無論是人、動物、植物還是細菌組織,該方法對少量的組織(20-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠滿足RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶?;し治齪頭腫涌寺〉雀骼嗌鋟腫友笛樾棖?。

注意事項:
1. 當TRIpure用量少于2ml時建議使用清潔的一次性的聚丙材質試管。
2. 當TRIpure用量較大時,可以使用玻璃試管(Corex)或聚丙材質試管,事先檢驗以確保該試管可以耐受加入TRIpure和氯仿后12,000×g的離心力。不可使用有裂縫或者破損的試管。
3. 離心前小心平衡試管。
4. 離心前玻璃管口必須蓋上鋁箔并用石蠟膜封口,聚丙烯管必須蓋緊。
5. 從少量的組織(1~10mg)或細胞(102~104)中分離RNA樣品:往組織或細胞中加800µlTRIpure。待樣品裂解后,加入氯仿并進行步驟2中的抽提操作。在用異丙醇沉淀RNA之前,加入5~10μg無RNA酶的glycogen作為水樣層的載體。為降低其黏度在加入氯仿前用26號注射器抽吸兩次以切斷基因組DNA。Glycogen會留在水樣層中并和RNA共析出。在濃縮到4mg/ml之前它不會抑制逆轉錄反應第一鏈的合成也不會抑制PCR。
6. 在勻化后和加入氯仿之前,樣品可以在–60~–70°C保存至少一個月。RNA沉淀(步
驟4,RNA漂洗)溶于75%的乙醇在2~8°C至少可以保存一周,在–5~–20°C下至少可保存一年。
7. 臺式離心機最大能達到2,600×g的離心力,如果將離心時間延長到30~60分鐘可
以滿足步驟2和步驟3中的操作。

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